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并取决于轮虫休眠卵量和水温 ? 水温20~25℃ 休眠卵量100~200

更新时间:2019-10-29 10:13点击:

  第二章 第二节 轮虫的培养 发展概况__国外饵料培育 ? 1960伊藤隆发现轮虫繁殖率大,在人工养鳗 池中大量繁生,并引起水质恶化 ? ? 日本用人工培养的轮虫喂养香鱼仔鱼 1965 年用轮虫饲养真鲷苗种 发展概况__国内饵料培育 ? 20世纪50年代末才开始轮虫的培养和利用, 但大部分培养的是海水褶皱臂尾轮虫,用于 鱼类和甲壳类的培养 ? ? 70年代以后才有培养淡水轮虫的报道 最近对萼花臂尾轮虫的休眠卵的形成机理和 萌发进行了研究 为轮虫休眠卵的集约化养殖提供科学依据 ? 发展概况__作为指示生物 ? 日本叶轮虫(Argonotholca japonica ):盐度 (‰ )30~40 指示种 独角毛轮虫( Synchaeta okai ):盐度 20~30 的指示生物 玫瑰旋轮虫(PhiIodina roseola)、狭甲轮虫 (Colurella sp. ):pH3~6 长刺三肢轮虫(Filinia longiseta)、萼花臂尾 轮虫(Brachionus calyciflorus):pH8~10 ? ? ? 轮虫的生物学__分类地位 ? 扁形动物(Platyhelminthes)的轮虫纲或 线形动物(Nemathelminthes)轮虫纲 (Rotifera) ? 轮虫门(Rotifera) 轮虫的生物学__形态特征 轮虫的生物学__繁殖习性 ? 非混交雌体 – 进行孤雌生殖的雌体 – 每一个体一生可产10~20 个左右的卵,夏卵不 需受精,直接发育成雌体 轮虫的生物学__繁殖习性 ? 混交雌体 – 有性生殖雌体 – 产生的冬卵需受精 – 混交雌体的产生是轮虫由孤雌生殖向有性生殖 转变及休眠卵形成的第一步 – 它的产生受外源性和内源性因素的影响和制约 *外源性因素 ? 生育酚:低剂量?-生育酚,可诱导轮虫形成混交雌体 ? 光照周期:持续光照或每天 15 h光照可诱导产生混交 雌体;波长和强度对晶囊轮虫混交雌体的形成有影响 ? 种群密度:轮虫幼体分泌化学物质,随种群密度的增 加,该化学物质也随之积累,达到一定水平可诱导混 交雌体的产生 ? 低温刺激:急剧的冷休克处理可提高后代混交雌体的 百分率 ? 食物的质与量:食物种类、浓度可影响混交雌体的百 分率 ? 培养液的 pH:10.5 时形成混交雌体的百分率高, pH7.5 最低 ? 培养液的盐度:较高盐度可影响或阻止混交雌体的出 现 * 内源性因素 ? 遗传因素:混交雌体的产生由遗传因子决定,环境 因素对其具有调节作用 ? 母体的年龄:随母体的年龄的增加,混交雌体的百 分率就下降 ? 轮虫孤雌生殖的积累世代: 轮虫的生物学__繁殖习性 ? 繁殖速度 – 在适宜的条件下,水温22~24.5℃,盐度 22 ~ 25,每1 mL中放3个带卵成体,经过 10 d的培养,可增殖到610 ~ 980 ind / mL 轮虫的生物学__生态习性 ? ? 分布:池塘、江河、湖泊、水库、沟渠、海洋等 pH: pH>7 的水体中,个体数量多 pH<7 的环境中,个体数量少 ? ? 温度:繁殖水温20 ~ 25℃ ,10℃以下出现冬卵 盐度:3.82~43,最适20~30或0.5以下;我国培养 海水种在15~25 ? 饵料:细菌、藻类、腐屑、小型原生动物,滤食的颗 粒大小为18~26μm 轮虫的培育__概述 ? 室内工厂化培养对象:褶皱臂尾轮虫 ? ? 饵料:小球藻、扁藻、衣藻等。 培养条件 – 水温:20~25℃ – pH值:7~8 – 投喂量: 小球藻:105~106 cells/mL 酵母:3 mg/L;分次 轮虫的培育__种的分离与保种 ? 轮虫种来源 – 天然水体分离 – 在温暖的季节(15℃以上),在各种水体 用浮游生物网捞取浮游生物样 – 解剖镜下用吸管将轮虫吸出 轮虫的培育__种的分离与保种 ? 轮虫保种:保存冬卵 – 秋冬季从池底的沉淀物收集轮虫冬卵 – 可直接将含轮虫卵的底泥放入冰柜保存 – 需要时加入盐度为15~25的海水,待轮虫 冬卵孵化后,用筛绢滤出轮虫,再转移到 培养水体中培养 轮虫的培育__集约化培育 ? ? ? ? ? ? 培养容器 种级培养:三角烧瓶、细口瓶、玻璃缸 扩大培养:玻璃钢桶 大量培养:常用水泥池 化学消毒:有效氯或高锰酸钾 高温消毒:小型培养容器 轮虫的培育__集约化培育 ? ? 培养用水 大量培养:砂滤水 ? 种级培养:消毒水 轮虫的培育__集约化培育 ? ? ? ? 培养条件和管理 盐度:15~25 温度:25~28℃ 饵料:微藻和酵母 *微藻喂养轮虫的注意事项: ?选用处于指数生长期的微藻 ?没有原生动物:直接向高密度微藻接种轮虫时 ?给予一定的光照:微藻的生长可利用培养液中的 代谢废物,改善水质 *低成本的替代饵料:面包酵母,冰柜保存 ?投喂:少量水融化,充分搅拌制成酵母悬液,然 后施入培养轮虫的水体 ?投喂量:l g/100万个轮虫· 天 ?次数:2~4次/天 轮虫的培育__集约化培育 ? 充气 – 除种级培养外一般都需要充气,特别是用面包酵 母培养轮虫时 – 作用:补充氧气;防止饵料下沉 – 注意事项:气量调小,只要轮虫不因缺氧而漂浮 在水面就行 – 日常管理:检查充气系统,及时纠正过大或过小 的充气 轮虫的培育__集约化培育 ? 水质管理 – 只有通过换水不断补充新藻液才能培养出 高密度的轮虫,减少水体的占用 – 面包酵母培养轮虫:每日换水一次,换水 量为50%;如果池底很脏,还需要用虹吸 管清底 – 倒池:大量的原生动物繁殖时 轮虫的培育__集约化培育 ? 轮虫生长的检查 – 生长良好:个体肥大,肠胃饱满,游动活泼, 轮虫成体带夏卵的比例和数目多 – 生长不良:死壳多,身体上附着污物,沉底, 不活泼,不带卵或带冬卵,雄体出现 – 轮虫密度:可肉眼估计,镜检最好 轮虫的培育__营养强化 ? ω3系列不饱和脂肪酸:特别是二十碳五烯酸 (EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)缺乏造 成的危害最为严重 ? 轮虫体内的EPA/DHA主要从其摄食的饵料 中获取,而海洋微藻中EPA/DHA含量通常 都较高 强化轮虫EPA/DHA的方式主要有两种方法 ? 轮虫的培育__营养强化 ? 用富含EPA/DHA的海洋微藻强化轮虫 – 将酵母轮虫用海洋微藻进行再次培养 – 但应选用ω3系列不饱和脂肪酸(特别EPA和 DHA)含量丰富的藻种:三角褐指藻、新月菱 形藻、纤细角毛藻、球等鞭金藻、小球藻、微绿 球藻等 – 以小球藻和微绿球藻较好 轮虫的培育__营养强化 ? 用富含EPA/DHA的海洋微藻强化轮虫 – 培养准备:在消毒后的玻璃钢桶内加入高密度 (700万/mL)的藻液 – 用筛绢收集酵母轮虫并用干净海水冲洗数遍 – 强化培养 ?轮虫的密度:400~500 ind/mL ?不间断充气 ?控温:25℃~28℃ ?强化时间:24~48 h ?更换藻液:微藻被轮虫食尽,滤出轮虫加藻液 轮虫的培育__营养强化 ? 强化剂强化轮虫 – 强化剂:含有多种不饱和脂肪酸和维生素 – 强化剂的品牌很多,不同型号的强化剂所 含的成分不完全相同,使用时应根据其使 用说明操作 – 以比利时INVE公司Super selco为例将强化 步骤简介如下: 轮虫的培育__营养强化 ? 强化剂强化轮虫 – 强化缸:具锥形底的琉璃钢桶。消毒后加入25℃ 的过滤海水。布入充气管,采用大气泡充气,不 要使用气石 – 筛绢网收集轮虫,冲洗后转移到强化缸中,轮虫 密度为300~500 ind/mL – 用量:50 g/L,加少量水混匀后倒入强化缸,强化 3~4 h后,重复一次 – 强化后:用筛绢网滤出轮虫,用海水充分洗涤 轮虫的培育__敞池培育 ?日本:室内水泥池密度可达1000 ind/mL以上,如织 田邦明等(1991)以小球藻为饵料培养轮虫密度高达 2000~4000 ind/mL ?台湾的吴烟红等用小球藻和酵母培养轮虫,在10 L水 中,其密度达到1500 ind/mL ?法国费里函库公司研制的轮虫培养的高效饵料已形 成商品 轮虫的培育__敞池培育 ?我国从50年代始也引进日本工厂化轮虫培养技术, 目前生产规模虽不大,但一些小型试验也有相当大的 密度 ? 如叶振江和陈大纲(1995),用鲜酵母为饵培养轮 虫密度可达1500 ind/mL,只是稳定性不够 轮虫的培育__敞池培育 ?轮虫的休眠卵 – 通常蕴藏在水体沉积物中。学者一直在寻找一种 合适的定性、定量轮虫休眠卵的方法,为敞池增 殖轮虫打下坚实的基础 – 伊腾隆(1958)和Nipkow(1961)将混有轮虫休眠 卵的沉积物置镜下直接计数 – May(1986)用“萌发法”,从孵出的虫体数推算沉 积物中的卵量 – 但此两法不能分离卵也不能准确定量 附:池塘习见轮虫休眠卵的检索 1.球形或近似球形???????????????????????????????????????????????????????????????2 1.其它形状??????????????????????????????????????????????????????????????????????3 2.卵径100um,卵壳具大型泡状突起,壳缘可见不甚整齐的半圆形饰物??????晶囊轮虫(Asplanchna.sp)休 眠卵 2.卵径小,约50um,卵壳具长刺??????????????????????????疣毛轮虫(Synchaeta.sp) 3.肾形、卵状肾形或卵形????????????????????????????????????????????????????????4 3.椭球形????????????????????????????????????????????????????????????????????????9 4肾形或卵肾形??????????????????????????????????????????????????????????????????5 4.卵形??????????????????????????????????????????????????????????????????????????8 5.卵较小,长径100um,短径80um,卵壳饰纹点状,胚胎先端平齐,卵盖清晰???????????????????????角突臂 尾轮虫(Brachionus angularis)休眠卵 5.卵大,卵径100um,卵壳饰纹条状或网状??????????????????????????????????????6 6.条状饰纹粗而清晰,壳缘具凹凸不平的突起。胚胎两端钝圆???萼花臂尾轮虫(B.calyciflorus)休眠卵。 6.饰纹和壳缘突起均不甚清晰,胚胎先端常平齐????????????????????????????????7 7.胚胎位于卵之小端,产自淡水或低咸水??????壶状臂尾轮虫(B.urceus)休眠卵。 7.胚胎常位于卵之大端,产自咸水或半咸水????????????????????????????褶皱臂尾轮虫(B.plicatilis)休眠卵。 8.壳面饰物呈泡状突出,不同侧面卵形有变?????????????????????????????长三肢轮虫(filinia longiseta)休眠卵 8.壳面饰物骨条状,常呈辐射多层排列??????多肢轮虫(Polyarthra sp)休眠卵 9.卵壳具明显棘刺?????????????????????????????????????????????????????????????10 9.卵壳无明显棘刺??????????????????????????????????????????????????????????????11 10.棘刺密而比较均匀,休眠卵宿存???前额犀轮虫(Rhinoglena frontalis)休眠卵 10.棘刺稀疏而不均匀,休眠卵非宿存??????????????????????????螺形龟甲轮虫(Keratella cochlearis)休眠卵 11.卵壳上具辐射状分布的骨条状饰纹,花纹稀疏,单层排列,壳缘波折????????????曲腿龟甲轮虫(K.valga) 休眠卵 11,装饰物排列无序,呈线纹或点纹????????????????????????????????????????????12 12.壳面具粗线纹,边缘突起明显,呈峰状,卵径100um???????????????矩形臂尾轮虫(B.leydigi)休眠卵 12.壳面具或粗或细的点纹,边缘无明显突出物,卵径80um??????????矩形龟甲轮虫(K.quadrata)休眠卵 轮虫的培育__敞池培育 ?轮虫休眠卵的采集、分离和定量 – 每池设2~4个点 – 休眠卵采集器采取约10 cm 厚底泥,并切取上部5 cm高 度的泥层置容积为1000 mL 的盛泥钵中 – 加水稀释到600 mL,搅拌 均匀后取出10 mL,注入50 mL的烧瓶中准备分离 轮虫的培育__敞池培育 ?轮虫休眠卵的采集、分离和定量 – 制备糖盐高渗液:饱和食盐水加入其重量20%的 蔗糖 – 分离:将高渗液徐徐加入上述盛泥浆水的烧瓶中, 用玻棒搅动1 min,静置20 min;等泥沙下沉后再 搅动,并再加高渗液(同时冲洗搅棒),使液面 略突出于瓶口;这时休眠卵逐渐上浮。为使观察 清晰,可加1~2滴碘液让其着色(用于萌发的卵 不可加碘),20 min后即可计数 轮虫的培育__敞池培育 ?轮虫休眠卵的采集、分离和定量 – 计数时,先用计数框在突出瓶口的液面上粘取上浮 休眠卵,随即置低倍镜下观察并计数,一般粘取 3~4片即可将上浮休眠卵取尽 – 休眠卵的数量可按下式计算: N──休眠卵数量(ind/cm2或万/ m2) Pn──观察到的休眠卵数量(ind) V──被稀释后的泥水体积(mL) S──采泥器底面积(cm2) U──所取泥浆水样体积(mL) V ? Pn N? U ?S 轮虫的培育__敞池培育 ?提高池塘轮虫生物量的途径 ? 许多池塘沉积物中蕴藏着相当丰富的轮虫休眠卵 ? 在水温5~40℃,pH4.5~11.5,溶氧0.3 mg/L的 条件下可以萌发 ? 若能采取人为激活措施,其萌发速率还可提高 ? 但最终能否获得更高的生物量,则取决于轮虫增 殖条件的满足程度 轮虫的培育__敞池培育 ?提高池塘轮虫生物量的途径 —选池 ?大型臂尾轮虫(萼花臂尾轮虫、壶状臂尾轮虫或褶皱臂尾 轮虫)休眠卵量100万/m2的池塘均可做轮虫培育池。但晶 囊轮虫休眠卵过多者最好不用 ?符合以上条件者多是一些底质腐泥化程度极高或多年饲养 底层鱼类的池塘 ?水深:1.5~2 m,面积2000~3333 m2 ?为便于饵料池的设置和水质调控,培育池最好毗邻大型水 体(贮水池、水库等);切忌把单独水体选为轮虫培育池 轮虫的培育__敞池培育 ?提高池塘轮虫生物量的途径 —排水冻底 ?秋末排水令其自然冰冻越冬 ?可促进休眠卵的萌发,还可冻死敌害 ?特别是那些难以用药物杀灭的底栖敌害生物如 才女虫等 轮虫的培育__敞池培育 ?提高池塘轮虫生物量的途径 —清塘晒底 ?对于那些冬季不结冰的低纬度地区的培育池, 用生石灰或50 g/t的漂白粉实施排水清塘 ?晾晒5~7 d可以起到清除敌害和激活休眠卵萌 发的作用 轮虫的培育__敞池培育 ?提高池塘轮虫生物量的途径 —注水搅底 ? 初注水量:20~30 cm ? 最终平均水深:1.5~2 m ? 搅动底泥:使沉积于底质中的休眠卵上浮或沉落于泥表 以获得萌发所必需的溶氧、光照等 ? 无论冻底、清塘晒底,都只有注水后轮虫休眠卵才能萌 发,生产上可以用注水时间来控制池塘轮虫达到高峰期 (1万个/L)的时间,并取决于轮虫休眠卵量和水温 ? 水温20~25℃ 休眠卵量100~200万/m2 水温℃ 轮虫达到高 峰期(1万 /L)的天数 (自注水日 计算) 10~8 15~10 20~15 25~20 30 ∞ 休眠卵量 轮虫达到 (万/m2) 高峰期(1 万/L)的 天数 (自注 水日计算) 100 10 100~200 10~8 200~400 8~5 500 5~3 20~25 17~20 15~17 10~15 5~10 5 轮虫的培育__敞池培育 ?提高池塘轮虫生物量的途径 —水肥度调控 ? 前期调控原则:先瘦后肥 ? 在轮虫大量发生(500~1000 ind/L)前不用施肥,让浮 游植物利用池塘固有肥力自然繁殖起来,透明度保持30~ 40cm,pH9.5,溶氧适中 ? 后期:轮虫密度1000 ind/L时,施肥(化肥+有机肥), 透明度降至20~30 cm,这时即使出现短暂的高pH、高溶 氧现象,但整个水质也会因轮虫与浮游植物间的互相制约 而得以平衡 轮虫的培育__敞池培育 ?提高池塘轮虫生物量的途径 —投饵 ?总原则:浮游植物、有机碎屑和菌类食物混合投喂 ?透明度10 cm:补充有机碎屑(粪肥、豆浆等)或 菌类(光合细菌、酵母等)食物,可有效地降低过 高的pH和溶氧 ?透明度30 cm:首先考虑补注富含浮游植物的肥水, 同时补充上述食物 ?保证足量的单胞藻是轮虫培育成败的关键 轮虫的培育__敞池培育 ?提高池塘轮虫生物量的途径 —增氧 ?轮虫生物量极大(>2万/L)或阴雨天、凌晨也会 缺氧 ?生物增氧:调节好水体肥度,利用浮游植物 ?安装增氧机:在深夜和阴雨天启动,最好以实测溶 氧指标( 3 mg/L)为准 轮虫的培育__敞池培育 ?敌害防治 —主要敌害:甲壳动物、摇蚊幼虫、多毛类幼体、 大型原生动物和丝状藻类 —防治策略:以防为主-彻底清塘,严格滤水 轮虫的培育__敞池培育 ?敌害防治 —具体措施 ?甲壳动物 ?0.5~1.2 g/m3的晶体敌百虫全池泼洒 ?一般情况(常温,中等肥水)下枝角类0.5 g/t, 虾、钩虾和摇蚊幼虫 1.0 g/t,桡足类1~1.2 g/t 轮虫的培育__敞池培育 ?敌害防治 —具体措施 ?多毛类 ?沿海池塘中一种海稚虫幼虫,体长约1 mm左右, 大量存在时严重影响轮虫的繁殖 ?凡经过冻底的池塘,只要注水时用密筛绢网 (150目)严格过滤,则可得到有效控制 ?一旦发生使用茶饼水泼洒亦有效果 轮虫的培育__敞池培育 ?敌害防治 —具体措施 ?大型原生动物:直径50 μm ?室内大量投喂酵母时最易繁殖;工厂化高密度培 养轮虫时,游仆虫是一大害 ?室外土池:以单胞藻为食物时很难形成优势种群, 危害不大。但若投喂酵母(如啤酒酵母),则很可 能出现游仆虫,其危害程度视原生动物与轮虫的相 对密度而不同 ?相对密度 3:1时:同步增长,对轮虫繁殖影响不 大,超过此值应停止投喂酵母而补注富含浮游植 物的肥水 ?控制施肥和投饵的种类与时间:采用先施化肥培 养非鞭毛单胞藻,等轮虫大量繁殖(1000个/L) 后再追施有机肥和投喂酵母的办法 ?卤虫:体长5~7 mm,密度500~1000 ind/L,经 1~2昼夜可基本清除,然后将卤虫用密网捞出或 用敌百虫(1 g/t)杀掉。如果池塘面积不大,可 将卤虫置孔径1 mm尼龙筛绢网箱中,沉入水体, 待原生动物清除后将网箱取出即可 轮虫的培育__敞池培育 ?敌害防治 —具体措施 ?丝状藻类 ?包括丝状绿藻(水绵,刚毛藻等)、丝状蓝藻 (螺旋藻、颤藻等),丝状硅藻(角毛藻、直链 藻等) ?其危害一是丝体长大(50 μm)很难被轮虫滤 食且消耗营养盐,有极强的克藻作用 ?一些特大型种类(大螺旋藻,丝状绿藻等)还 会在抽滤轮虫时一起被滤在网中而无法排除 ? 预防措施: ?保持适当的混浊度:施肥(有机),投饵 (酵母)和搅动底泥 ?轮虫的灯光诱捕 ?网捞 ?零星:手网捞出 ?遍布池塘:小孔径大拉网捞取 ?丝状硅藻、蓝藻、裸藻:强化有机碎屑和菌 类食物的投喂 轮虫的培育__敞池培育 ?抽滤与换水 —轮虫密度达2~3万/L:用150目筛绢网抽滤,通 常666.7 m2水体(水深1 m)架设1台4英寸泵每天 抽滤2~3 h,其抽出量与繁殖量大体平衡 —土池育(蟹、虾)苗:直接注入育苗池,同时 向轮虫池补注等量肥水 —必须另备浮游植物培养池,专供补换水用 —必须选择轮虫密度较大的位置和水层架设水泵 轮虫的培育__敞池培育 ?保护卵资源 —针对沉积物中贮有大量轮虫休眠卵的池塘:春 季停止抽滤或轮虫高峰期消落后,立即采取措施 (包括投饵、施肥等)强化培育一批轮虫,使其 达到高密度并产生大量休眠卵 轮虫的培育__敞池培育 ?保护卵资源 —如果选用新建池塘或底泥中很少休眠卵 的水体,则必须引种 —其方式有三:沉积物移植、休眠卵移植 和虫体移植 ?沉积物移植 ? 选富含(500万/m2)轮虫休眠卵的水底沉积物 ? 挖出后加少量(1%)生石灰调节pH近中性 ? 兑成浆均匀泼洒于培养池中 ? 此法的优点是既引卵又施肥,缺点是劳动量大 ?休眠卵移植 ? 将事先收集好的轮虫休眠卵用袋装法(300目筛绢 制成)置水下10~20 cm处,待轮虫孵出后再解袋 放虫 ? 如有足够的休眠卵此法省力省工 ?虫体移植 ? 将室内或室外其它池塘正处于指数增长期的轮虫, 按100~1000 ind/L的密度,一次性投放培养池中 ? 投放密度视水体肥度而定,水瘦(透明度> 30cm ),投放密度稀(100个/L);水肥(透明 度25cm),投放密度大(500~1000个/L) ? 如能保证种源,此法成功率高,且速度较快

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